結(jié)直腸癌（CRC）的發(fā)生發(fā)展以 mTORC2 信號通路的持續(xù)激活為核心驅(qū)動，其介導(dǎo)的細胞增殖與遷移被視為惡性轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因素，但目前針對 mTOR 催化活性的抑制劑在臨床應(yīng)用中仍存在耐藥性或反應(yīng)不一，這提示復(fù)合物內(nèi)部結(jié)構(gòu)穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)存在尚未被發(fā)現(xiàn)的放大機制。SLAP 蛋白作為已知的抑癌因子在 CRC 中顯著下調(diào)，且具有抑制致癌信號的潛力，但其是否以及如何通過干預(yù) mTORC2 核心復(fù)合物的完整性來協(xié)同阻斷腫瘤進展仍屬未知。本文即在這一背景下，系統(tǒng)探討 SLAP 在結(jié)直腸癌中的抑癌作用，并重點解析其通過 UBE3C 介導(dǎo) mLST8 非降解性泛素化從而瓦解 mTORC2 復(fù)合物的分子機制。

SLAP 促進了由 UBE3C 介導(dǎo)的 mLST8 賴氨酸位點（K86 和 K215）的非降解性泛素化，進而破壞了 mTORC2 復(fù)合物的結(jié)構(gòu)完整性，從而抑制其促癌活性。SLAP 的差異化表達決定了結(jié)直腸癌（CRC）細胞對 mTOR 催化抑制劑（mTORCi）的應(yīng)答敏感性：SLAP 低表達的腫瘤細胞對 mTORCi 表現(xiàn)敏感，而 SLAP 高表達的細胞則可能出現(xiàn)悖論式激活。

結(jié)論 1：SLAP是mTORC2 的內(nèi)源性抑制蛋白并下調(diào)其信號活性

研究者首先通過質(zhì)譜篩選發(fā)現(xiàn) SLAP 與 mTORC2 的核心組分存在物理互作。內(nèi)源性免疫共沉淀實驗證實 SLAP 能與 RICTOR 和 mTOR 結(jié)合。隨后，在 CRC 細胞系中過表達 SLAP顯著降低了 mTORC2 經(jīng)典下游底物 AKT（S473）和 NDRG1（T346）的磷酸化水平，而對 mTORC1 底物影響較小。這初步證明了 SLAP 是 mTORC2 信號通路的負調(diào)控因子。

Fig1. SLAP抑癌功能由mTORC2介導(dǎo)

結(jié)論 2：SLAP 抑制結(jié)直腸癌的惡性表型高度依賴于 mTORC2 的存在

為了確認 SLAP 的抑癌功能是否通過 mTORC2 實現(xiàn)，研究者進行了功能回復(fù)實驗。結(jié)果顯示，敲低 SLAP 會顯著增強細胞的侵襲力、遷移能力和克隆形成率；然而，當(dāng)同步敲低 mTORC2 的關(guān)鍵組分 RICTOR 時，由 SLAP 缺失導(dǎo)致的促癌效應(yīng)被逆轉(zhuǎn)。這在邏輯上建立了 SLAP 發(fā)揮抑癌作用的必要條件：必須通過抑制 mTORC2 軸來實現(xiàn)。

Fig2. SLAP與mLST8結(jié)合介導(dǎo)其抑癌功能

結(jié)論 3：SLAP 通過直接靶向 mLST8 來干擾 mTORC2 復(fù)合物的組裝

研究者進一步探索 SLAP 如何干擾復(fù)合物的物理結(jié)構(gòu)。結(jié)構(gòu)域缺失實驗表明，SLAP 與 RICTOR 的結(jié)合依賴于 mLST8 作為橋梁，SLAP 直接結(jié)合的是 mLST8。功能驗證顯示，人為增加 mLST8 的表達水平可以拮抗 SLAP 的抑癌作用，并恢復(fù)被抑制的 mTORC2 信號。這鎖定并確認了 mLST8 是 SLAP 調(diào)控整個復(fù)合物穩(wěn)定性的關(guān)鍵分子靶點。

Fig3. SLAP通過LST8泛素化調(diào)控mTORC2組裝

結(jié)論 4：SLAP 募集 UBE3C 介導(dǎo) mLST8 非降解性泛素化調(diào)控復(fù)合物解體

在分子機制層面，研究揭示了 SLAP 并非通過降解蛋白質(zhì)來起作用。實驗證明SLAP 募集了 E3 泛素連接酶 UBE3C，進而使得 mLST8 在 K86 和 K215 位點發(fā)生泛素化修飾。關(guān)鍵的生物物理分析顯示，這種泛素化修飾不會引起 mLST8 的蛋白酶體降解，而是通過空間位阻效應(yīng)直接導(dǎo)致 mLST8 從 RICTOR/mTOR 復(fù)合物中脫離。復(fù)合物的“解體”終關(guān)閉了信號傳導(dǎo)。

Fig. SLAP與UBE3C相互作用促進LST8泛素化和mTORC2抑制

研究邏輯總結(jié)：

研究首先通過Co-IP分析確立了 SLAP 與 mTORC2 復(fù)合物的特異性結(jié)合，并證明其抑癌活性高度依賴于對該信號軸的下調(diào)作用；隨后在分子水平鎖定 mLST8 為其核心調(diào)控靶點，揭示了 SLAP 通過募集 E3 泛素連接酶 UBE3C 介導(dǎo) mLST8 發(fā)生非降解性泛素化修飾（K86/K215位點）的獨特機制。這一修飾導(dǎo)致了 mTORC2 復(fù)合物的物理結(jié)構(gòu)解體而非蛋白降解，從而阻斷了促癌信號傳導(dǎo)。該研究不僅發(fā)現(xiàn)了 mTORC2 完整性的內(nèi)源性調(diào)控開關(guān)，更為針對結(jié)直腸癌的干預(yù)提供了“破壞復(fù)合物穩(wěn)定性”的治療策略。